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                          通用型基因組DNA提取試劑盒規格

                          簡要描述:

                          通用型基因組DNA提取試劑盒規格的相關產品:93-35-6傘形花內酯 規格: 20mg

                          55466-05-2棗仁皂甙B; 棗仁皂B 規格: HPLC≥98%,20mg/支

                          107912-97-0伯利亞遠志糖A5 規格: HPLC≥98%;20mg

                          更新時間:2022-02-10

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                          通用型基因組DNA提取試劑盒規格

                          PCR實驗方法步驟:

                          方法

                          1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

                          10×PCR buffer

                          5 μl     dNTP mix (2mM)

                          4 μl     引物1(10pM)

                          2 μl     引物2(10pM)

                          2 μl     Taq酶 (2U/μl)

                          1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

                          1 μl      加ddH2O至 50 μl

                          產品特點:

                          ◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

                          ◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

                          ◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

                          ◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

                          操作流程:

                          收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數據庫——>質粒實物保存。

                          特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他非科研用途!

                          產品名稱

                          規格

                          貨號

                          通用型基因組DNA提取試劑盒規格

                          32次/盒、96次/盒、48次/盒、

                          FS-01H3215

                           


                          操作流程.jpg

                           

                          實時熒光定量PCR:

                          實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統定量只能終點檢測的局限,實現了每一輪循環均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:

                          1)Ct值的重現性PCR循環在到達Ct值所在的循環數時,剛剛進入真正的指數擴增期(對數期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。

                          2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

                          外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

                          定量PCR方法:

                          a、競爭法

                          選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。

                          b、內參照法

                          在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測

                          使用方法:

                          一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

                          1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

                          2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

                          3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

                          4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

                          5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

                          6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

                          二、樣品 DNA 的制備

                          7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。

                          8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

                          三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

                          9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

                          33390-42-01,3,5,8-四羥基-2,4-雙(3- 規格: HPLC≥98%;20mg

                          6989-38-4吳茱萸內酯 規格: 20mg

                          74805-92-8麥冬甲基黃烷A 規格: HPLC≥98%,10mg

                          62-46-4辛 規格: HPLC≥98%;20mg

                          野漆樹 規格: 10mg

                          69-89-6黃;2,6-Dihydroxypur 規格: 20mg

                          93-35-6傘形花內酯 規格: 20mg

                          55466-05-2棗仁皂甙B; 棗仁皂B 規格: HPLC≥98%,20mg/支

                          107912-97-0伯利亞遠志糖A5 規格: HPLC≥98%;20mg

                          白薇對照藥材 規格: 1g

                          通用型基因組DNA提取試劑盒規格Rabbit Anti-horse IgG/AP  性磷(AP)標記的兔抗馬IgG 規格: 0.1mlRFESD  RFESD抗體 規格: 0.2ml

                          Lysozyme  溶菌抗體 規格: 0.1ml

                          APOA2  載脂A2抗體 規格: 0.1ml

                          phospho-TPH(Ser19)   磷化色氨羥化抗體 規格: 0.1ml

                          PFK2/PFKFB3  6磷果糖激2抗體 規格: 0.2ml

                          BFSP2/Phakinin  晶狀體2抗體 規格: 0.2mlphospho-c-Raf(Ser296)  磷化原基因c-Raf抗體 規格: 0.1ml

                          Rabbit Anti-Mink IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標記的兔抗貂IgG 規格: 0.1mlMIIP  IGFBP2結合/遷移和侵潤抑制抗體 規格: 0.2ml

                          phospho-SHC(Tyr239/240)  磷化SH2結構域轉化1抗體 規格: 0.1ml

                          PPM2C  蛋2C抗體 規格: 0.2ml

                          Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標記的羊抗小鼠IgM 規格: 0.1mlArfaptin 1  ADP核糖基化因子結合1抗體 規格: 0.1ml

                          GIMAP5  GTPIMAP家族成員5抗體 規格: 0.2ml

                           


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