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                          禽波氏桿菌PCR試劑盒注意事項與原則
                          點擊次數:812 更新時間:2021-04-13

                          禽波氏桿菌PCR試劑盒注意事項:

                          ①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

                          ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

                          ③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

                          ④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

                          ⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

                          ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

                          ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

                          ⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

                          ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

                          禽波氏桿菌PCR試劑盒原則:

                          ①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。

                          ②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。

                          ③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。

                          ④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。

                          ⑤引物3'端的堿基,特別是末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。

                          ⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。

                          ⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。

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