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                          科研抗原的樣品收集及注意事項
                          點擊次數:1190 更新時間:2021-04-02

                          科研抗原樣品收集:

                          1. 血清:全血樣品于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。

                          2. 血漿:抗凝劑推薦使用EDTA-Na2,樣品采集后30分鐘內于1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測。避免使用溶血,高血脂樣品。

                          3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反復凍融。將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

                          4. 細胞培養上清:取細胞培養上清于1000×g離心20分鐘,除去雜質及細胞碎片。取上清檢測。

                          5. 其它生物樣品:1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測

                          6. 樣品應清澈透明,懸浮物應離心去除。

                          7. 樣品收集后若在1周內進行檢測的可保存于4℃,若不能及時檢測,請按一次使用量分裝,凍存于-20℃(1個月內檢測),或-80℃(6個月內檢測),避免反復凍融。

                          8. 如果您的樣品中檢測物濃度高于標準品高值,請根據實際情況,做適當倍數稀釋(建議先做預實驗,以確定稀釋倍數)。

                          科研抗原注意事項:

                          ①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

                          ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

                          ③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

                          ④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

                          ⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

                          ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

                          ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

                          ⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

                          ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

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