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                          曲霉屬通用PCR試劑盒操作步驟事項方法
                          點擊次數:900 更新時間:2021-02-04

                          曲霉屬通用PCR試劑盒操作步驟:

                          (1)其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。

                          (2) 靈敏度高
                          PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中小檢出率為3個細菌。

                          (3) 簡便、快速
                          PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。

                          (4) 對標本的純度要求低
                          不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板??芍苯佑门R床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。

                          曲霉屬通用PCR試劑盒注意事項:

                          ①加入試劑的順序應*,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。

                          ②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

                          ③按照曲霉屬通用PCR試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

                          ④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

                          ⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

                          ⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。

                          ⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。

                          ⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。

                          ⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質前使用。

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