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                          原代細胞培養與操作方法
                          點擊次數:1436 更新時間:2021-01-13

                          原代細胞的培養:

                          原代細胞的培養是指直接從機體取下細胞、組織和器官后立即進行培養。因此,較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養,此時的細胞保持原有細胞的基本性質,如果是正常細胞,仍然保留二倍體數。但實際上,通常把第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。

                          原代細胞的培養有組織塊培養和分散細胞培養。

                          組織塊培養是將剪碎的組織塊直接移植在培養瓶壁上,加入培養基后進行培養。

                          分散細胞培養大致步驟為:

                          將動物組織從機體中取出離散成單個細胞(常用胰蛋白酶),置合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖(注意整個過程無菌)。

                          原代細胞操作方法:

                          (1)取成年新西蘭大白兔,耳緣靜脈注射空氣處死后,取下兔子的雙腿,立即用75%乙醇浸泡。

                          (2)移入細胞房內,去除雙腿表面的皮毛及肌肉,剪取關節段,移至超菌工作臺內。

                          (3)PBS洗滌數次,用手術刀或彎剪將關節表面的軟骨組織取下。

                          (4)軟骨組織塊靜置5min,棄去上層液體及懸浮組織,將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化15-20min;

                          (5) 4℃靜置5min;棄上清,PBS洗滌,去上清。加入0.2%膠原酶II,置入37℃的恒溫搖床中,振蕩消化2H;
                          (6)加入生長培養基終止消化,反復吹打后依次通過200目濾網。收集濾液,1200rpm離心8min,棄上清,用DMEM*培養基重新懸浮細胞, 放入37℃,5%CO2細胞培養箱中培養;

                          (7)細胞傳代后放入預置有薄骨片或蓋玻片的培養板中進行培養。細胞*展開后即可固定做原代鑒定。

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