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                          細胞的說明培養流程和注意事項
                          點擊次數:1555 更新時間:2018-11-20

                          細胞接收后的操作流程與注意事項

                          1. 細胞收到后建議在培養箱穩定4小時左右再依據細胞密度,換液培養或傳代。

                          2. 如果細胞為貼壁細胞,而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態,請將懸浮的細胞及時離心,加15%血清的*培養基到新的培養皿/瓶中繼續培養3天;同時原培養瓶中剩下的貼壁細胞更換為15%血清的*培養基,培養2-3天。若3天后細胞都沒有出現增殖而是繼續脫落死亡,請及時聯系實驗室,技術人員會跟進解決。

                          3. 貼壁細胞生長緩慢:適當提高血清濃度(高不超過20%),或可根據該細胞生長密度,考慮胰酶消化后,轉移到新的培養瓶繼續培養。

                          4. 生長不均:貼壁細胞若出現生長不均,成島狀生長,可將細胞進行消化,重新打散細胞,加入新鮮培養基進行培養。

                           

                          細胞常規培養傳代流程(請嚴格遵守無菌操作)

                          1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS緩沖液潤洗細胞兩次,加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化(注意把握消化時間,通??刂圃?~2min)。

                          2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁運動時(不建議消化到細胞漂?。┤サ粢让?,加6~8ml *培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落、吹散。

                          3. 取出部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的*培養基,于培養箱中培養。

                          4. 注意培養基PH值變化情況,定期換液,待細胞密度達到70-80%時重復傳代操作或者凍存。

                           

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